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          上海遠慕生物科技有限公司

          發酵過程染菌的防治措施
          點擊次數:862 更新時間:2024-02-28

          發酵染菌:指在發酵過程中生產菌以外的其他微生物侵入了發酵系統,從而使發酵過程失去真正意義上的純種培養。

          染菌對發酵的影響

          一、染菌對不同發酵過程的影響

          1、青mei素發酵過程:由于許多雜菌都能產生青mei素酶,因此不管染菌是發生在發酵前期、中期或后期,都會使青mei素迅速分解破壞,使目的產物得率降低,危害十分嚴重。

          2、核苷或核苷酸發酵過程:由于所用的生產菌種是多種營養缺陷型微生物,其生長能力差,所需的培養基營養豐富,因此容易受到雜菌的污染,且染菌后,培養基中的營養成分迅速被消耗,嚴重抑制了生產菌的生長和代謝產物的生成。

          3、檸檬酸等有機酸發酵過程:一般在產酸后發酵液的pH值比較低,雜菌生長十分困難,在發酵中、后期不太會發生染菌,主要是要預防發酵前期染菌。

          4、谷an酸發酵:周期短,生產菌繁殖快,培養基不太豐富,一般較少污染雜菌,但噬菌體污染對谷an酸發酵的影響較大。

          二、染菌發生的不同時間對發酵的影響

          1、種子培養期染菌

          種子培養主要是使微生物細胞生長與繁殖,此時,微生物菌體濃度低,培養基地營養十分豐富,比較容易染菌。

          若將污染的種子帶入發酵罐,則危害極大,因此應嚴格控制種子染菌的發生。

          一旦發現種子受到雜菌的污染,應經滅菌后棄去,并對種子罐、管道等進行仔細檢查和徹di滅菌。

          2、發酵前期染菌

          在發酵前期,微生物菌體主要是處于生長、繁殖階段,此時期代謝的產物很少,相對而言這個時期也容易染菌。

          染菌后的雜菌將迅速繁殖,與生產菌爭奪培養基中的營養物質,嚴重干擾生產菌的正常生長、繁殖及產物的生成。

          3、發酵中期染菌

          發酵中期染菌將會導致培養基中的營養物質大量消耗,并嚴重干擾生產菌的代謝,影響產物的生成。

          有的染菌后雜菌大量繁殖,產生酸性物質,使pH值下降,糖、氮等的消耗加速;菌體自溶,致使發酵液發粘,產生大量的泡沫,代謝產物的積累減少或停止;

          有的染菌后會使已生成的產物被利用或破壞。

          從目前的情況來看,發酵中期染菌一般較難挽救,危害性較大,在生產過程中應盡力做到早發現、快處理。

          4、發酵后期染菌

          由于發酵后期培養基中的糖等營養物質已接近耗盡,且發酵的產物也已積累較多,如果染菌量不太多,對發酵影響相對來說就要小一些,可繼續進行發酵。

          對發酵產物來說,發酵后期染菌對不同的產物的影響也是不同的,如抗生素、檸檬酸的發酵,染菌對產物的影響不大;肌ji苷酸、谷an酸等地發酵,后期染菌也會影響產物的產量、提取和產品的質量。

          發酵異?,F象及原因分析

          發酵過程中的種子培養和發酵的異?,F象是指發酵過程中某些物理參數、化學參數或生物參數發生與原有規律不同的改變,這些改變必然影響發酵水平,使生產蒙受損失。對此應及時查明原因,加以解決。

          一、種子培養和發酵的異?,F象

          1、種子培養異常(表現為培養的種子質量不合格):菌體生長緩慢;菌絲結團;代謝不正常。

          2、發酵異常:菌體生長差;pH值過高或過低;溶解氧水平異常;泡沫過多;菌體濃度過高或過低;菌體生長差。

          二、染菌的檢查和判斷

          發酵過程是否染菌應以無菌試驗的結果為依據進行判斷。

          在發酵過程中,如何及早發現雜菌的污染并及時采取措施加以處理,是避免染菌造成嚴重經濟損失的重要手段。因此,生產上要求能準確、迅速的檢查出雜菌的污染。

          目前常用于檢查是否染菌的無菌試驗方法主要有:顯微鏡檢查法、肉湯培養法、平板(雙碟)培養法、發酵過程的異常觀察法(如溶氧量)等。

          此法檢查雜菌最jian簡單、最直接、最chang用。必要時還可進行芽胞染色或鞭毛染色。

          1、顯微鏡檢查法(鏡檢法)

          用革蘭氏染色法(Grams stain)對樣品進行涂片、染色,然后在顯微鏡下觀察微生物的形態特征,根據生產菌與雜菌的特征進行區別、判斷是否染菌。如發現有與生產菌形態特征不一樣的其它微生物的存在,就可判斷為發生了染菌。

          2、肉湯培養法(用于檢查培養基和無菌空氣是否帶菌,同時此法也可用于噬菌體的檢查)

          通常用葡萄糖酚紅肉湯作為培養基,將待測樣品直接接入經wan全滅菌后的肉湯培養基中,分別于37℃、27℃進行培養,隨時觀察微生物的生長情況,并取樣進行鏡檢,判斷是否有雜菌。

          葡萄糖酚紅肉湯培養基配方:0.3%牛肉膏、0.5%葡萄糖、0.5%NaCl、0.8%蛋白胨、0.4%酚紅溶液,pH 7.2。

          3、平板劃線培養或斜面培養檢查法

          將待測樣品在無菌平板上劃線,分別于37℃、27℃進行培養,一般24h后即可進行鏡檢觀察,檢查是否有雜菌。有時為了提高平板培養法的靈敏度,也可將需要檢查的樣品先置于37℃培養6h,使雜菌迅速增殖后再劃線培養。

          4、注意點

          無菌試驗時,如果肉湯連續三次發生變色反應(紅色→黃色)或產生混濁,或平板培養連續三次發現有異常菌落的出現,即可判斷為染菌;

          有時肉湯培養的陽性反應不夠明顯,而發酵樣品的各項參數確有可疑染菌,并經鏡檢等其它方法確認連續三次樣品有相同類型的異常菌存在,也應該判斷為染菌;

          一般來講,無菌試驗的肉湯或培養平板應保存并觀察至本批(罐)放罐后12h,確認為無雜菌后才能棄去;

          無菌試驗期間應每6h觀察一次無菌試驗樣品,以便能及早發現染菌。

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