ELISA試劑盒選擇的八條黃金準則
點擊次數：1035 更新時間：2017-08-25
ELISA試劑盒選擇的八條黃金準則
酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA) 技術從1970年代發展至今已近半個世紀，是一項實驗室zui基本的免疫檢測技術，被廣泛的應用于基礎研究和臨床檢驗。那么面對市面上數以千計的試劑盒，數百家供應商，對于剛進入實驗室的新手或者準備開展ELISA實驗的人員， 又該如何選擇且質量又可靠的ELISA試劑盒呢？
不要急，本文將為您提供*的八條黃金法則！今天我們是雷鋒！
1. 首先選定ELISA類型
ELISA技術可用于測定抗原，也可用于測定抗體。ELISA方法中有三個必要的試劑：(1) 固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；(2) 酶標記的抗原或抗體，稱為"結合物"（conjugate）；(3) 酶反應的底物。
一般可將ELISA分為以下幾種類型，實驗君首先需要根據自己的待檢物來確定試劑盒類型。
1)雙抗體夾心法：針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標檢測抗體。適用于測定二價或二價以上的大分子抗原如血漿中的細胞因子，不適用于測定半抗原及小分子單價抗原。同理，也有雙抗原夾心法測抗體。
2)直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標記的一抗，即可測定抗原總量。此法操作手續簡短，因無須使用二抗可避免交互反應。
3)間接法：間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來檢測與固相抗原結合的待檢抗體。
4)競爭法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。
2. 根據實驗物種及待檢樣品性質來選擇ELISA
如果實驗君的實驗樣品為人、小鼠或大鼠樣品，那么要選擇一個合適的試劑盒相對容易，但如果您的實驗樣品來源于其他物種如雞、牛、猴等，則市面上能提供的試劑盒種類卻很少。且不可輕信能提供近萬種試劑盒，覆蓋多物種的供應商。但如果又非要檢測這些物種的指標時，要對待檢物(如有種屬差異性)進行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應數據。對于樣品類型而言，一般的商業化試劑盒都經過血清、血漿和細胞培養上清液的驗證。在選擇試劑盒時，要詳細閱讀說明書，比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容。另外，在某些情形下樣品中會存在干擾因素比如溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體(HAMA)、細胞培養上清中含胎牛血清等。因此需根據樣品來選擇試劑盒，必要時還要根據樣本來適當優化。或在樣品收集前，先閱讀一些可靠供應商試劑盒的說明書或直接咨詢。如果您的樣品為組織或細胞裂解物，則需要更謹慎的選擇試劑盒。市面上大多數的商業化試劑盒沒有經過多種來源組織樣本的驗證。這需要實驗君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對，都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白，還要考慮組織樣品的基質效應(Matrix Effect)等。但如果實驗君要了解組織樣品的制備問題，我們另起一文來總結。
3. 根據樣品中檢測物水平來選擇試劑盒
如果實驗君對于樣品中待檢物的水平沒有任何可參考的數據，選擇寬動力學檢測范圍的試劑盒。如果樣品中待檢物的含量很低，建議選擇高靈敏度的試劑盒。為了降低基質效應，有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠超過試劑盒的檢測范圍（標曲范圍）， 也需做適當的倍數稀釋。在zui后計算結果時，需乘以相應的稀釋倍數。
4. 根據樣本可獲得性來選擇試劑盒
通常而言，商業化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供應商的試劑盒對樣品的用量要求可少至10ul。如果您的樣品很珍貴或較難獲取，則需要認真考慮試劑盒對樣品用量的要求。如果樣品量少，且要做多因子檢測時更需謹慎。
5. 細致比較試劑盒關鍵性技術參數
ELISA試劑盒的關鍵技術參數包括板內差異性、板間差異性、批間差異性、重復性、特異性及交叉反應性、回收率等。如果實驗君經常開展ELISA實驗，建議使用同一廠家的試劑盒，這樣可盡量保證數據的重復性(當然前提是實驗條件的一致性)。對于科研用的定量ELISA試劑盒，不同的生產廠家使用的抗體對、酶以及底物、生產工藝和研發實力不盡相同，自然不同廠家試劑盒測出的數據會有差異。
6. 供應商資質評估
縱觀國內外ELISA試劑盒供應商，估計至少100余家。有些供應商可提供數百種常用指標ELISA，然而有些供應商則聲稱可提供數千種甚至上萬種指標的試劑盒，但質量參差不齊，更有濫竽充數禍害科研之輩。那如果選擇供應商呢？ *. 從同行或實驗室同僚了解供應商的口碑，售前售后的處理情況。第二. 查詢供應商的詳細了解相關指標，可查詢這些指標是否已經開發出特異性抗體？如果查遍連抗體都還不可獲取，又如何開發出ELISA試劑盒呢？ 第三. 文獻引用是*，尤其是SCI期刊文章對供應商產品的引用。第四. 了解供應商的研發歷史和品牌史，很多供應商頻頻更換公司名或更換公司注冊地，其中名堂實驗君應該能悟出。不要迷信國外“品牌”，國外“品牌”不代表是。很多打著國外旗號的公司，其實就是空殼的皮包公司，從OEM劣質產品。國外供應商也有售后不給力的時候。
7. 經費預算
說了半天，還是要看課題經費的預算。沒經費咋搞科研呢？*的一般質量可靠，文獻引用多。但品牌由于進口和運輸等成本較高，因此售價也較高。其實國產品牌也是不錯的選擇， 因省去不少物流和報關費用，與國外進口試劑盒相比價格上有比較大的優惠，而且能提供比較靈活的包裝規格, 如48tests小包裝，非常適合中國國情。國內ELISA品牌靠譜的還是許多家的，這里就不做硬廣告了。
8. 認清訂購渠道
不論是還是國內品牌，都需要在訂購前先與生產廠商詳細溝通產品細節（比如酶標板是否可拆卸），了解售前售后技術服務能力等。然后咨詢其*訂購渠道，比如直接向廠家訂購或通過中國區或省級授權代理商經銷商訂購。謹防假冒產品，花了錢是小事，實驗數據的可靠性、真實性是大事呀，耽誤了時間延遲了畢業更是不無處訴苦！ 空留傷心淚。選擇正規渠道，選擇品質！早發高質量Paper!
