遠慕詳述：PCR-DNA實驗注意事項
點擊次數：1550 更新時間：2017-01-09
PCR-DNA實驗注意事項
1．加樣方面（混勻，不要有氣泡，管壁上不要有液體）
2．試劑方面（冷凍，不宜反復凍融超過3次；可分裝）
3．使用非肝素鈉抗凝劑采血管
4．實驗室方面（實驗做完注意通風、84清理臺面、紫外線殺菌）
5．注意污染（平常配試劑管蓋的放置不要污染、加樣時指甲及手套不要碰到管內壁）
實驗操作步驟
1.室溫融解；
2.取血清（或標準品）50ul加入50ul核酸提取液先震蕩混勻10秒然后6000轉瞬間離心一下（等離心機轉速到了接近6000按停止）99度水煮或干浴10分鐘，稍微彈碎；然后13000轉離心10分鐘保留上清液備用
3.配混合液
取N*36ul混合液+N*0.4ulTAQ酶混勻（先震蕩混勻10秒然后6000轉瞬間離心）（N為管數，實際上我們要取N+1因為加樣管壁上會沾液不多配會導致zui后一個有誤差例如有10個樣本則取11*36+11*0.4；）
4.取上述混合液36.5ul分別加入pcr反應管不要有氣泡管壁不要有水珠
5.加樣取4ul上清液加入pcr管加樣槍在液體里面反復打個7~8下zui后在離心機稍微離一下6000轉瞬間離心6.上機反應檢查管壁水珠氣泡
實驗結果方面
1.標準曲線相關系數至少為-0.99越小越好
2.根據曲線分析結果（曲線是否穩，無波浪）38循環曲線抬頭為陰性
實線抬頭曲線不抬頭為YMDD變異（實線---病毒量虛線---判斷有無變異）
21個循環值大概為7次方后面加3.5個循環減少一個次方即24.5左右為6次方......
友情提示：上述操作不一定全正確，請自行參考各試劑廠試劑說明書以及檢驗方面相關資料。
